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    血清影響ELISA實驗假陽怎么辦?

    發(fā)布時間: 2023-09-19  點擊次數(shù): 951次

    人血清中IgM、IgG型類風濕因子(RF)可以與ELISA系統(tǒng)中的捕獲抗體及酶標記二抗的FC段直接結合,從而導致假陽性。要怎樣解決呢?請看以下操作。

    ①用F(ab)2替代完整的IzG;

    ②標本用聯(lián)有熱變性(63C,10nin)IgG的固相吸附劑處理(將熱變性IgG加入到標本稀釋液中同樣有效);檢測抗原時,可以用2-疏基乙酸等加入到標本稀釋液中,使RF降解。

    (2)補體ELISA&系統(tǒng)中固相一抗和標記二抗過程中,抗體分子發(fā)生變構,其FC段的補體C1q分子結合位點被暴露出來,使C1q可以將二者連接起來,從而造成假陽性。解決的辦法是:①用EDT8稀釋標本;②用53,10nin或56C,30min加熱血清使C1q滅活。

    (3)嗜異性抗體人類血清中含有能與嚙齒類動物(如鼠等)Ig(s)結合的天然嗜異性抗體,可將ELISA系統(tǒng)中一抗和二抗連接起來,也能造成假陽性。解決的辦法是:可在標本稀釋液中加入過里的動物Iz(s),但加入里不足或亞類不同時無效。

    (4)靶抗原的自身抗體抗甲狀腺球蛋白、抗胰島素等嗜靶抗原的自身抗體,有時能與靶抗原結合形成復合物,在ELISA方法中均可干猶抗原抗體測定結果。為避免以上情況出現(xiàn),解決的辦法是:測定前需用理化方法將其解離后再測定。

    (5)醫(yī)源性誘導的抗鼠Ig(s)抗體臨床開展的用鼠源性CD3等單克隆抗體治療,用放射性同位素標記鼠源性抗體的影像診斷及靶向治療等新技術,均有可能使這些病人體內(nèi)產(chǎn)生抗鼠抗體;另外,被鼠等嚙齒類動物咬傷的病人體內(nèi)也可以產(chǎn)生抗鼠Ig(s)抗體。這些病人ELIS測定時均可產(chǎn)生假陽性。解決的辦法是:測定抗原時,在標本中加入足里的正常鼠Ig(s),從而克服由于上述原因造成的假陽性。

    (6)交叉反應物質(zhì)類AFP樣物質(zhì)等,是與靶抗原有交叉反應的物質(zhì)。在用多抗測定抗原時對測定結果影響不大,但在用單克隆抗體測定抗原時,如果交叉抗原決定簇正好是所用單克隆抗體相對應的靶決定簇時,也會出現(xiàn)假陽性結果。

    (7)進口ELISA試劑盒標本中其它成分的影響血清脂質(zhì)過高、膽紅素、血紅蛋白及血液粘度過大等,均對ELISA測定結果有干擾作用。

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